KIT-03112 基因**快速表達試劑盒
品牌：ZIQIBIO
CAS號：NULL
供應(yīng)商：上海子起生物科技有限公司
數(shù)量：大于10個
保質(zhì)期：2-3年4OO_ 811 _ 9081 I368I6I966Z
保存條件：4度或以下
基因**快速表達試劑盒使用說明書
名稱 KIT-03112 基因**快速表達試劑盒
貨號 KIT-03112 技術(shù)熱線400-811-9081
包裝規(guī)格 一家實驗室購買一套可**無限次使用
試劑盒內(nèi)容 �。�1）9種表達載體
�。�2）2種穿刺菌種
�。�3）1種抗生
如有需要產(chǎn)品說明書請撥打技術(shù)熱線400-811-9081
一、產(chǎn)品簡介
二、基因克隆
三、基因表達
四、載體資料
五、相關(guān)產(chǎn)品4OO_ 811 _ 9081 I368I6I966Z
六、參考文獻
七、試劑盒質(zhì)量驗收標準
聯(lián)系人:楊先生
400-811-9081
KIT-03112 基因**快速表達試劑盒
一、產(chǎn)品簡介
原核表達系統(tǒng)近年來研究取得**性進展
1998年，美國Incyte Pharmaceutical公司華裔科學(xué)家Zhang Yang在《Protein expression andpurification》(vol12,159-165)上發(fā)表論文《Expression of Eukaryotic proteins insoluble form in Escherichia coli》，文章采用E.coli分子內(nèi)伴侶DsbA技術(shù)將IGF-I、IGFBP-3、3Cproteinase、TGFb-2、STGFb-RII、BDNF、GDNF、mEGFBP、Leptin和GFP十個基因全部實現(xiàn)了可溶性表達，且表達量均大于25%。更為驚奇的是由于DsbA分子伴侶的作用使得擁有9個半胱氨酸的復(fù)雜結(jié)構(gòu)的IGFBP-3能在E.coli內(nèi)形成可溶性具生物活性的高表達重組蛋白。
2002年，美國冷泉港實驗室出版的《ProteinScience》(2002,11:313-321)上發(fā)表了瑞典科學(xué)家Torleif《Rapid screening for improvedsolubility of small human proteins produced as fusion proteins in Escherichia coli》一文，從而揭開了原核**快速組合篩選表達系統(tǒng)用于蛋白組學(xué)研究的序幕。
KIT-03112 基因**快速表達試劑盒
近年來Medline報導(dǎo)了大量利用原核表達獲得有活性的可溶蛋白，現(xiàn)舉例如下：GeneExpression methodIndexProinsulinDsbA fusionJ.Biotechnol 2001 84(2):175-85htPADsbA coexpressionAppl Environ Microbiol 1998 64(12):4891-6Bovine enterokinaseDsbA fusionBiotech nology(NY),1995,13(9):982-7MucinMBP fusionProtein Expr Purif 1999,15(1)146-54Human angiogeninOmpA signalBiochem Mol Biol Int1999,47(2):267-73Bacillus lipaseOmpA signalAppl Microbiol Biotechnol 1998 Apr;49(14):405-10HEV antigenThioredoxin fusionZhonghua shi yan he lin chuang bing du xue za zhi 2002,16(1):20-2P55 TNF receptorThioredoxin fusionProtein Expr purif 2001,23(2)226-32hLH/CG receptorThioredoxin fusionEndocrine 2001,14(2):205-12Pokeweed antiviral proteinMBP fusionProtein Expr Purif 1999,15(1)146-54
產(chǎn)品特色
本公司通過和留美學(xué)者合作，現(xiàn)向國內(nèi)推出原核基因**快速表達試劑盒。它將九種表達載體包括分泌型、引導(dǎo)分泌型、胞內(nèi)直接表達型、分子內(nèi)伴侶協(xié)助折疊型、高度穩(wěn)定伴侶型等系統(tǒng)的多克隆位點統(tǒng)一，同時統(tǒng)一了誘導(dǎo)表達劑和統(tǒng)一了培養(yǎng)基，一次可以同時克隆九種載體進行表達篩選，極大地節(jié)省寶貴的科研時間。其實，象美國Amgen、Gentech、Incyte這類**的生物技術(shù)公司也是采用多系統(tǒng)多載體同時篩選快速表達的策略。這一策略的**優(yōu)勢就是快速且成功率高。本系統(tǒng)非常適合高通量快速篩選大量未知基因，對基因組學(xué)和蛋白組學(xué)的研究是一個不可缺少的工具。
KIT-03112 基因**快速表達試劑盒
1）提供詳實的操作說明和豐富的參考文獻。
2）下游多種親和層析組合方便您快速純化目的蛋白。
3）分子內(nèi)伴侶和分泌表達能**限度避免包涵體形成，直接獲得有活性可溶蛋白，這一點對于未知基因功能的研究很重要。
4）九套**表達載體同時克隆篩選，極大地節(jié)省您寶貴的科研時間。
5）T7溶菌酶和lacIq阻遏蛋白能起到嚴格控制誘導(dǎo)前表達的作用，同時強啟動子、高拷貝復(fù)制子等方法結(jié)合可獲得高達50%的表達量。
6）已有400多個基因通過該試劑盒而表達成功。4OO_ 811 _ 9081 I368I6I966Z
本試劑盒包括：穿刺菌株、***和統(tǒng)一多克隆位點的九種表達載體。用戶只要擴增出一段不帶終止密碼子或帶終止密碼子的閱讀框編碼基因克隆進九種表達載體，可同時篩選，節(jié)省時間。一般兩至三周可以篩選出表達菌株，在此基礎(chǔ)上，進一步根據(jù)需要進行實驗室菌株的優(yōu)化從而成為工程菌株。
本試劑盒采用的技術(shù)路線如下：
您提供的基因ORF 九種表達載體
技術(shù)熱線400-811-9081 索取未顯示資料
克隆
KIT-03112 基因**快速表達試劑盒
ˉ誘導(dǎo)（小樣）
ˉSDS—PAGE分析
篩選出表達菌株
ˉ
發(fā)酵（中樣）
ˉ
親和層純化融合蛋白
ˉ
純化
ˉ4OO_ 811 _ 9081 I368I6I966Z
目標蛋白
由于大腸桿菌表達系統(tǒng)遺傳背景清楚、易于大規(guī)模發(fā)酵等優(yōu)點，尤其是近年來采用分子內(nèi)伴侶的技術(shù)（如Trx、DsbA等）使得許多外源基因能在E.coli里正確折疊，如IL—11、GM—CSF、INF、 Insulin甚至包括結(jié)構(gòu)復(fù)雜的tPA等均可獲得正確折疊的重組可溶性活性蛋白，使得E.coli**快速表達系統(tǒng)仍然是分子生物學(xué)實驗室一個不可缺少的工具。
本試劑盒包括凍干菌株、***和統(tǒng)一多克隆位點的九種表達載體。用戶只要擴增克隆出一段不帶終止密碼子或者帶終止密碼子的閱讀框編碼基因克隆進九種表達載體，可同時篩選，節(jié)省時 KIT-03112 基因**快速表達試劑盒
間。一般兩至三周可以篩選出表達菌株，在此基礎(chǔ)上，進一步根據(jù)需要進行實驗室菌株的優(yōu)化從而成為工程菌株。
pLLP—OmpA表達載體采用E.coli強啟動lpp和OmpA分泌信號肽，同時在C端添加了6個His可采用chelating sepharose親和層析純化目標蛋白。該表達載體成功地實現(xiàn)過人生長**的基因工程工業(yè)化。經(jīng)多年臨床驗證，分泌型重組人生長**臨床副反應(yīng)大大低于包涵體型的重組人生長**。
pLLP—STII表達載體采用E.coli強啟動lpp和STII分泌信號肽，同時在C端添加了6個His便于采用chelating sepharose親和層析純化目標蛋白。STII信號肽引導(dǎo)能力強且易于被E.coli信號肽酶切割。即使**個氨基酸是半胱胺酸的干擾素也可以實現(xiàn)分泌表達。
pMBP—P表達載體采用 E.coli tac啟動子和分泌型麥芽糖結(jié)合蛋白（maltose bindingprotein）同時選用凝血酶切割位點并在C端添加6個His便于采用chelating sepharose親和層析純化目標蛋白。該表達系統(tǒng)在Medline里有大量的背景文獻參考。它通過MBP引導(dǎo)分泌，可以實現(xiàn)許多基因在周質(zhì)空間里正確折疊，如TPO（1-153aa）、GM—CSF、IL—2等。我們采用這一表達系統(tǒng)配合固相化的凝血酶成功地獲得了正確折疊的rhGM—CSF，臨床試用表明其副反應(yīng)比包涵體型rhGM—CSF大大降低。該表達載體表達的蛋白還可通過Amylose親和層析。
pMBP—C表達載體采用E.coli tac啟動子和胞內(nèi)可溶性麥芽糖結(jié)合蛋白（maltose bindingprotein），同時選用凝血酶切割位點并在C端添加6個His便于采用chelating sepharose親和層析純化目標蛋白。該表達系統(tǒng)在Medline里有大量背景文獻參考。它通過MBP胞內(nèi)融合表達，表達產(chǎn)物可占菌體的20%—30%，可形成可溶性蛋白，也可形成包涵體。融合蛋白還可以通過 KIT-03112 基因**快速表達試劑盒 |
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